簡介

盡管存在解剖和（hé）生理上的差異，小鼠在研究人類肺部疾病，包括急性肺損傷（ALI）和（hé）肺纖維化方麵仍具有極高（gāo）的價值。治療方法是諸多肺（fèi）部疾病（bìng）研究的核心，其中（zhōng）口咽（yān）吸入法（OPA）已被廣泛（fàn）用，但其缺點是部分藥劑可能被吞入胃腸道，從（cóng）而導（dǎo）致給藥劑量的不準確；另一種（zhǒng）是經氣管給藥，這涉及到在深度麻（má）醉狀態下切開氣管直（zhí）接將藥（yào）物注入到呼（hū）吸道，然而，這種操作不僅因其（qí）侵入性和造成呼吸道損傷而不可取，還存在耗時過長，且操作者需（xū）要大量的訓練等（děng）問題。

1999年，Brown等人發表研究論文描述了一種小鼠肺部直接插管的方法（fǎ），後（hòu）續也有其他幾（jǐ）篇論文描述了不同的小鼠肺（fèi）部插管方法，但這（zhè）種插管的主要問題是：當插管（guǎn）導管接近氣管並準備插入時，導管本身會阻擋光線，從而（ér）無法看清需（xū）要插入的位置。

本文展示了如何簡單、低成本地消除這個可視化問題，從而確保在（zài）相對（duì）少的培訓或經驗下成功進行插管（guǎn）。

方法

準備：

1、導管。對於20-35 g小（xiǎo）鼠的插管，我們使用1或1.5英寸長，20 g IV導管(BD Insylte, Sparks, MD或（huò）Jelco Optiva, Carlsbad, CA)。可以為每隻小鼠使用（yòng）新的無菌導管，但導管也可以在消毒（dú）後用70%乙醇浸泡過夜重複使用。盡管小鼠的咽部和氣管不是（shì）無菌的，但應遵循適當的清潔程序，包括使用無菌手套和器械。

2、光纖電纜。我們使（shǐ）用約（yuē）70厘米長、0.5毫米粗的Edmund Optics光纜，但長（zhǎng）度（dù）不是決定性（xìng）的因素。重要的是要確保纖維的邊緣是平滑的，因為在用剃刀（dāo）切割電纜後，邊緣相對較銳利，很容易刺（cì）穿氣管壁。然而隻需將光纖端部放在1000粒度的砂紙上，就可以非常容易地打磨平這個邊緣。另一端插入橡膠塞中。最簡便（biàn）的方法是先用18號針通（tōng）過橡膠塞，插入光纖（xiān）通過針（zhēn）孔（kǒng），然後撤出針。橡膠塞連接150瓦鹵素（sù）光源。重要的是要確保使用矽膠橡膠塞(或其他耐熱材料)，因為普通橡膠或軟木在靠近熱光源時可能會燃燒。

插管：

1、參見圖1和2。通過一段短矽橡膠管(ID≈0.8 mm×OD 4mm, Cole-Palmer, EW-96410-13)插入光纖電纜（lǎn）。將這（zhè）個橡（xiàng）膠管係緊，同時仍然允許調整光纖電纜。將矽膠管緊密地插入套管的魯（lǔ）爾端，固定光纖電纜在套管內（nèi）的位（wèi）置。調整光纖電纜的位置，使其在套管尖端前方約4毫米處（chù）穿過套管。

圖1.如圖所示，光纜插入（rù）矽橡膠塞中，與其相對的另一端緊綁著一（yī）小段矽橡膠管。

圖2.圖（tú）片展示了橡（xiàng）膠塞與光源的連接（jiē），光纖（xiān）的另一端穿過插管導管。左側還展示（shì）了一個簡單的支架，用於在插管過程中固定小鼠。

2、將麻醉後的小鼠放置在（zài）垂直支架上（shàng），由其（qí）上切（qiē）牙（yá）懸掛(圖3)。大多數研究者發現，當小鼠的腹側麵向自（zì）己時，視覺效果最佳。非常輕柔地拔出舌頭，用拇指和食指握住。中指放在（zài）頸部和塑料支架之間。利（lì）用食指和拇指對舌頭的牽引開啟口腔（qiāng），並用頸（jǐng）部後方的中指調整頭部的角度，使（shǐ）插管路（lù）徑伸直，如圖（tú）3所示。

圖3.兩個視角展示了準（zhǔn）備插管的小鼠位置

3、使（shǐ）用光纖電纜作為光源和導入器，推動它通過可視化聲帶。如果（guǒ）看不到聲帶，可以通過中指作為支點，輕輕用力拉舌頭。插入後，將套管再向前推進約5 mm。然後，小心不要移動套管，拔出光纖（xiān）電（diàn）纜。將小鼠（shǔ）平躺下來，用膠帶（dài）固定導管，並用橡皮泥(塑型黏土)支撐導管接頭，如圖4所示。

圖4。此圖展示了一隻準備通氣的已插管小鼠。圍繞嘴部的膠帶有助（zhù）於（yú）防止導管移動。一小塊（kuài）橡皮泥(建模黏（nián）土)提供了一個便利（lì）的支撐點，用（yòng）於固定導管接頭與呼吸（xī）機的連接。

4、步驟3中的操作不容（róng）易演示或教學，因為這是一個單獨的操作（zuò）。然而，通過對舌頭的牽引力和頭部後（hòu）麵的支（zhī）撐的微妙調整，幾乎所有嚐試這種方法的人都會很快找到正確的方式來調整小鼠的位置，使聲（shēng）帶可（kě）視化。

總結

本文描述（shù）的方法有幾個優點。首先（xiān），裝置簡單且價格（gé）低廉。製作裝置不需（xū）要任何特殊（shū）工具或昂貴的設（shè）備。在實（shí）踐中，對於從未嚐試過插管的研究員、學生和技術人員來說（shuō）更容（róng）易掌握。

在進行（háng）插管（guǎn）時，有幾個實際問題需（xū）要（yào）提及。在最初打開小（xiǎo）鼠口腔時，盡量（liàng）輕柔拉舌頭非常重要。如果使用無（wú）保護鉗，很容易損傷舌頭，這可能導致小鼠死亡。在首次學習如何插管時，最重要的是使用頸部（bù）後方的手指來調整（zhěng）頭部角度，以使氣管開口的可視（shì）化。如（rú）果（guǒ）操作正確，對（duì）舌頭進行足夠的牽拉，很容易看到聲帶。最初的可視化（huà）步驟通常需要最多（duō）的時間，因為一旦看到氣管開口，插入纖（xiān）維電纜和（hé）靜脈導管就相（xiàng）對簡單了（le）。

總之，本文描述的插管（guǎn）方法製作成本低，使用簡單，可以令大多數研究人（rén）員和實（shí）驗室技術人員在相對（duì）較少的經驗下快（kuài）速掌握小鼠插管技術。