骨髓穿刺抽吸（xī）技術  

骨髓穿刺抽吸技術的早期發展主要（yào）集（jí）中（zhōng）在人類醫學領（lǐng）域，隨後逐漸應用於動物研究。最初（chū）的技術（shù）較（jiào）為簡單，主要用（yòng）於獲取骨髓樣本（běn）以進行血液學和病理學（xué）分析。隨著研究（jiū）需求的增加，骨髓穿刺抽吸的技術（shù）逐漸得（dé）到了改進和優化，設備改進方麵引入了專用的骨髓穿（chuān）刺針，這（zhè）些穿刺針具備更（gèng）好的設計可以減少組織損傷和提高樣（yàng）本質量，以及在（zài）操作（zuò）過程中引入嚴格的無菌技術以（yǐ）減少感染的風險。

骨髓穿刺技術不僅在醫學研究中得到廣泛（fàn）應用還擴展到（dào）多個領域。藥物研（yán）發，評估新藥對骨（gǔ）髓（suǐ）的（de）影響，尤其是抗癌藥和免疫抑製藥物的研究中；毒理學研究中，同樣需要研究有毒物質對骨髓的影響；此外，基因治療，通過獲取骨髓細胞進行基因組研究和基因編輯實驗等都需要進行骨髓穿刺。本文（wén）將（jiāng）介紹實驗犬的骨髓穿刺抽吸技術。

采集部位

對於犬，骨髓樣本通常從股骨（gǔ）轉（zhuǎn）子窩、肱骨（gǔ）近（jìn）端（duān）或髂骨翼采集，其他部位（wèi）包括胸骨、肋（lèi）骨。如果骨盆和股骨區域含有豐富（fù）的脂肪組織，采集（jí）則會變得更具（jù）挑戰（zhàn）性。下文主要（yào）講述犬肱骨近端骨髓采集的操作程序。

肱（gōng）骨近端骨髓采集

材料和設備

○ 無菌手套（tào）

○ 電動剪毛器和清潔溶液

○ 局部麻醉藥（yào）（如利多卡因、布比卡因）

○ 含有2.5% - 3%乙二胺四（sì）乙酸溶液（EDTA約2 mL）的培養皿

○ 玻璃顯微（wēi）鏡載玻片

○ 顯微血細胞比容毛細血管（圖A），有毛細血（xuè）管球

○ 11號手術刀片

○ 無菌紗布

○ 10或12ml注射器

○ 14G至18G帶針芯的骨髓針（圖（tú）B和C）

A：骨髓穿刺所需的材料和設備

B：帶蓋和針芯的穿（chuān）刺針

C：已移除蓋和針芯的穿刺針（zhēn）

操作步（bù）驟（zhòu）

1、在進（jìn）行深度（dù）鎮靜或全身麻醉後，動物側臥位，修剪采集部位的（de）毛發，可以在采集部位皮下注射局部麻醉劑（如利多卡因、布比卡因），采（cǎi）集部位無菌清洗。如（rú）圖1A。

圖1A：動物側臥位，采集部位的毛發已剔除。

2、打（dǎ）開並（bìng）佩戴無菌手套。助理輔助將穿刺（cì）針、注射器和手術刀片打開並放入無菌區域，或將這些（xiē）物品以無菌的方式遞給術者。使用10或12ml的注射器，在保持無菌的情況下，抽取約1ml的EDTA溶液。如圖1B 。

圖1B：從培養皿中抽取EDTA溶液

3、將注射器放置在無菌區（qū）域內（nèi）。移除（chú）穿刺針的蓋子和針芯，通過（guò）順時針旋（xuán）轉確保針頭（tóu）的防護裝置（zhì）牢固地連接在針頭的基部。將含有EDTA的注射器連接（jiē）到（dào）針頭的頂部並旋緊。通過將EDTA噴回培養皿來灌注針頭，留下約（yuē）0.5 mL的EDTA在注射器中。灌注時保持在培養皿上方，不要讓無（wú）菌針頭的尖（jiān）端接觸培養皿，然後將注射器從針頭上移除，置於無菌區域內。重新裝上針芯和蓋子。注：在大型犬中，可以移除針頭防（fáng）護裝置，以方便進入髓（suǐ）腔（qiāng）。如圖1C。

圖1C：用EDTA溶液灌注穿刺（cì）針

4、觸摸（mō）並確（què）定肱骨（gǔ）近端外側的平坦區域，位（wèi）於大結節的遠端。確定肩（jiān）胛（jiǎ）骨和肱骨之間的肩關節，以確（què）保不會誤采到該區域。在平（píng）坦區域正上方的皮膚上（shàng）切開一個小口。如圖1D。

圖1D：在肱骨近端外側的平坦區域切開一個小口（kǒu）

5、牽拉皮膚，將（jiāng）針頭“彈入”切口，確保針頭已穿透深層皮下組織。重新確（què）認肱骨近端外側的平坦區域（yù），位於大結節的遠端（duān）。將（jiāng）針尖直接放在骨頭上，垂直於平麵（miàn）。以順時針和逆時針旋轉的方式適度施加壓力，直至（zhì）針頭穿透近端骨皮質。穿透皮質後，減小角度，使針頭（tóu）朝向肘部，平行（háng）於髓腔。繼續扭轉，直到針完（wán）全嵌入骨內。如圖1E。

圖1E：穿（chuān）刺針彈入切口

6、移除蓋子和針芯，並迅速連接含有（yǒu）EDTA的注射器。抽吸至可（kě）見（jiàn）紅骨髓（2 ~ 5 mL足夠），並將內容物排（pái）出到培養皿。如圖1F。

圖1F：將骨髓吸入裝有EDTA的注射器

7、骨髓包含在白色的針狀物中，表明穿刺（cì）成功。使用（yòng）毛（máo）細管或帶有（yǒu）毛細管（guǎn）球或移液管球的巴（bā）斯德移液管取出並排出這些顆粒，用（yòng）於血塗片製備。每片至少需要1個針狀物；然而，建議每張載（zǎi）玻片至少有3 ~ 5個較大的針狀物，以（yǐ）進（jìn）行充分評估。任何剩（shèng）餘的骨（gǔ）髓內容物都可以收集到EDTA管中，並與載玻片（piàn）一起（qǐ）送往實驗室。如圖1G。

圖1G：使用巴斯德吸管（guǎn）取出顆（kē）粒以製備血塗片

8、在動物恢複後給與鎮痛藥物（wù），並根據需要（yào）繼續（xù）使（shǐ）用。

潛（qián）在的不良反應、緩（huǎn）解措施或治（zhì）療方法

1、采樣部位感染，但這種情況很少見

2、對軟（ruǎn）組織如神經、肌肉和關節表麵的創傷

3、采樣部位出血（xuè）

4、術後疼痛

緩解措施

○ 密切注意無（wú）菌技術

○ 仔細辨別解剖標誌，準備（bèi）骨骼/骨標本以正確找到解剖標誌，避免對周圍組織造成意外創傷

○ 對采樣部位施加直接壓力，髓內出血不會引起（qǐ）大的問題，因（yīn）為血液會迅速被吸收

○ 術後疼痛通（tōng）常是短暫的，鎮痛藥用作鎮靜（jìng）/麻醉的預藥通常是足夠的，但如果需要也可以在術後使用

小結

為了提高骨髓穿刺抽吸的成功（gōng）率（lǜ）和樣本質量，必須（xū）製定全麵的標準操作程序（SOP），涵蓋動物準備、麻醉管理、穿刺操作及（jí）樣本處理等各個環（huán）節，並對實驗人員進行係統且廣泛的（de）培訓。此外，實（shí）驗研究人（rén）員（yuán）應持續優化和改進技術，精細化（huà）操作流程，提升效率與準確性，從而為生物醫學研究提供高質量的樣本（běn）和可靠（kào）的數（shù）據支持。