
小鼠麻醉指導原則
目的
本文是由(yóu)ARC獸(shòu)醫(yī)人員設計(jì)的小鼠麻醉指導原則,旨在提供一般(bān)建議。這並(bìng)不意味著它包含(hán)了適用(yòng)於小鼠的所有可能(néng)藥物組合的詳盡列表。具體的麻(má)醉方案應(yīng)根據特定情況和研究需求與(yǔ)所在機構的獸醫合作製定。
麻醉是使動物完全(quán)或部分失去感覺,伴隨(suí)或不伴隨意(yì)識喪失。動物可能需要麻醉(zuì)進行手術、可能引起疼痛的(de)非手術操作,或需要固定(dìng)的非疼痛操(cāo)作。在麻醉前(qián)、麻醉過程中和麻醉後,必須采(cǎi)取措施確保動物的安全和麻醉的有效(xiào)性。
麻醉(zuì)可通過胃腸外給藥或吸入給藥的方式進行。藥物的選擇取決於具體操(cāo)作、研究目的和其他因(yīn)素,如動物的年齡。對於新生小鼠,有些特別考慮下文進行了概述。如對(duì)藥(yào)物選擇有疑問,請谘詢所在機(jī)構的獸醫。
01、麻醉(zuì)的一般指導原則和注意事項
適應期:建議所有動(dòng)物在運(yùn)輸後適應一周(zhōu),以防止應激引起的反應。動物至少(shǎo)需要72小時才能恢(huī)複到(dào)基本生理狀態。
禁食:由於小鼠(shǔ)無法嘔吐,通常麻醉前無需(xū)禁食。然而,如需禁食(例如為了保(bǎo)持體重),因小鼠的高代謝率(lǜ),禁(jìn)食時間(jiān)不應超過2-3小時(shí)。請注意,切勿限製飲水。
眼睛保護(hù):在麻醉狀態下,小鼠的眼睛會持續睜開,可(kě)能(néng)導致角膜幹燥和損傷。因此,在如下條件下,應塗抹眼(yǎn)膏(如Puralube® 或 Lacrilube®)來保護眼睛。
麻醉(zuì)持(chí)續(xù)時間超過 5 min;
通過麵罩進行麻醉。
監護:無(wú)論使用何種麻(má)醉劑,均應監測麻(má)醉狀態(tài)下的小鼠,以確保心髒和呼吸功能不被過度抑製,以及麻醉深度適當。
在沒有專用(yòng)設備的情況下,可(kě)以監測以下(xià)麻醉小鼠的參數:
麻醉深度(dù):通過掐指檢查;
呼吸頻率(lǜ)和模式:正(zhèng)常未受幹擾的呼吸率約為 180 bpm,麻醉期間可接受 50% 的緩(huǎn)慢下降速(sù)率;
粘膜顏色:應為粉(fěn)紅色而非(fēi)藍色或灰(huī)色;
體溫(wēn):可使(shǐ)用直腸溫度計監測(cè)體溫,體溫應保持在 36℃ 以上;
血氧飽和度和心率:可用專用(yòng)的齧齒類動(dòng)物脈(mò)搏式血氧儀監測血氧飽和度 (> 95%) 和心率(300-800 bpm);
如對監護或(huò)監護設備(bèi)有任何問題,請(qǐng)與所在機構的獸醫聯係。
保溫(wēn):所有種(zhǒng)屬在麻醉狀態下均存在低(dī)體溫的風險。小鼠由於體表麵積與體重比高,尤其容易受到影響。低體溫對(duì)動物會產生(shēng)顯著的生理(lǐ)應激,可能延長恢複時間並有潛(qián)在致命風險。
在所有麻醉過程中(zhōng)提供額外的保溫措施(shī)。
補充熱源包括循環水毯、電熱墊和可在微波或水浴中加熱的(de)市售產品(如(rú)等溫墊或凝膠加熱器)。
切勿直接將動(dòng)物放(fàng)在熱源(yuán)上。
如對使用或購買額外的保溫來源(yuán)有疑問,請與您所在機構的(de)獸醫聯係。
補液:在麻醉時(shí)間較長或動物(wù)患病、老年或虛弱的情況下,考慮腹腔或(huò)皮下注射溫熱的液體。更多信息請谘詢(xún)您的獸醫。
恢複(fù):持續監測動物直至其(qí)完全恢複。
在幹淨的籠子裏,將動物放在紙巾上(不使用(yòng)墊料)。這樣可以最大程度地減少氣管阻塞或(huò)肺炎的風險。
麻醉後的動(dòng)物單獨放在(zài)一個籠子裏進行恢複(fù)。
恢複期間繼續提供額外(wài)的保溫。
當動物能夠走動時,將其送回原籠中子,並提(tí)供飼料(liào)和水(shuǐ)。
根據所進行的手術,為了避免同籠夥伴啃縫線(xiàn)或切口處的創傷,小(xiǎo)鼠可能需(xū)要在術後階段單獨飼養。任何單獨飼養的(de)計劃都應包括在IACUC方案中,以便(biàn)進(jìn)行審查和批準。
02、麻醉(zuì)藥物和程序
吸入麻(má)醉劑: 異氟烷是首(shǒu)選的吸入麻醉劑(jì)。 起效快、恢複可靠。
A. 吸入麻醉可以通過滴瓶法、誘導室、麵罩或氣管插管使用精密蒸汽器進行(háng)。
i.滴瓶法(fǎ):
a.請勿使小鼠直接接觸液體吸入麻醉(zuì)劑(可通過在棉花或紗布上放置不可滲透(tòu)的網格來實現)。
b. 由於無法控製室內(nèi)的麻(má)醉劑濃(nóng)度,並且(qiě)濃度可(kě)能迅(xùn)速達到有毒(dú)水(shuǐ)平,因此該(gāi)方(fāng)法僅適用於非常短的手術,如尾部活檢、皮下腫瘤植入或麵(miàn)罩麻醉前的誘導。
ii.誘導室、麵罩和氣管插管:
a.這些需要配備氧氣(qì)源和精密蒸發(fā)器的氣體麻醉機(jī)。一些研究單位可能使用室內(nèi)空氣而不是純氧作為氣源,這也是可接受的。
b.蒸發器必須與特定的吸入麻醉(zuì)劑兼容。
c.由於小鼠呼吸能力較小,使用非(fēi)循環呼吸係統。
iii. 當使用吸入性麻醉時,使用通風(fēng)櫃或配備氣(qì)體清除係統的(de)麻醉(zuì)係統,以盡量減少職業暴露於排出氣體。
B. 注(zhù)射麻(má)醉劑:氯胺酮/賽(sài)拉嗪聯合使用是小(xiǎo)鼠的(de)首選注射麻醉劑。
下麵列出了(le)其他常用的注射劑。
i. 小鼠對各種麻醉藥的敏感性差異顯著。 年齡、體質、品係、健康狀況、基因(yīn)調控和性別等因素都可能影響麻醉敏感性。以下劑量僅為一般指導原則,基於上述因素可(kě)能存在顯著(zhe)差異。在您的方案中添加麻醉劑時,建議提供一個範圍,以允許根據每隻動物的特定(dìng)需求進行給藥。
ii. 不建議在小鼠(shǔ)中進行肌肉注射(IM),因為可能導(dǎo)致組織刺激、跛行和自殘等並發(fā)症。
*一個很(hěn)好的初始方案是 100 mg/kg 氯胺酮和 7 mg/kg 塞拉嗪。
**阿替(tì)美唑(5 mg/mL)是右美(měi)托咪定(dìng)(0.5 mg/mL)濃度的 10 倍。
您需要 4-6 倍於右美托咪定體積的阿(ā)替美唑(5 mg/mL)來逆轉右美托咪定。然而,阿(ā)替美唑(zuò)的(de)安全範圍非常高,因此如(rú)果逆轉非常緊(jǐn)急,給予右美托咪定等體積(jī)的阿替美唑,可(kě)使阿替美唑的劑量增加 10 倍,這是安全的。
同樣,使用與塞拉嗪(20 mg/mL)等體積的阿替美唑 (5 mg/mL) 逆(nì)轉也有效。雖然塞拉嗪具有更高的濃度(20 mg/mL),但阿替美唑(5 mg/mL)更(gèng)純淨,且與α2 受體結(jié)合更緊密,因此等(děng)體積逆轉塞拉嗪(qín)也可行(háng)。
C. 注射麻醉劑的(de)一種類型是局部麻醉劑(jì)。
i. 局麻藥通過特異性結合神經細胞膜上的電壓門控 Na + 通道來阻斷神經衝(chōng)動。
ii. 給(gěi)藥(yào)途徑包括粘膜(鼻、眼等)局部給藥(yào)或直接注射到組織和神經束周圍。
iii. 在疼痛刺激(如切口)之前給予局部麻醉劑被認(rèn)為是輔助鎮痛藥物,與阿片類和 非甾體抗(kàng)炎藥(NSAID)一起使用。
iv. 由於持續(xù)時間較短(數小時),不鼓勵將(jiāng)局部麻醉劑作為主要鎮痛藥物使用,
03、對小(xiǎo)鼠麻醉的特殊考慮:仔鼠麻醉
目前文獻中描述了幾種適用於新生齧(niè)齒(chǐ)動物的麻醉方法,包括注射麻醉、吸入麻醉和低溫麻醉。
新生齧齒動物的(de)麻醉會導致(zhì)親代啃(kěn)食(shí)後代的問題。可通過確(què)保新生(shēng)仔鼠完(wán)全恢複(fù)後再歸還給母鼠來減少這種情況。其(qí)他(tā)措施包括讓幼仔接觸(chù)來自於母鼠籠中的(de)汙染墊料,並將幼仔放(fàng)在窩(wō)仔中間位置。
低溫麻醉
低溫麻醉隻適用於7日齡以下的新(xīn)生齧齒動物,並且不應(yīng)用於持續時間超過30分鍾的(de)手術。
動物不應直接置於冰上(在動物和底層冰浴之間使用乳膠手套或(huò)其他物(wù)質)。
當(dāng)足(zú)部反射消失時,動物已達到適當的麻醉水平。
手術過程中請勿使用白熾燈,因(yīn)為它會使手術區域變熱(rè),導致動物從手術麻醉狀態中蘇醒。
麻醉(zuì)後,動(dòng)物應緩慢複溫。快速升溫可能會(huì)導致組織(zhī)損傷。可使用循(xún)環水(shuǐ)毯、加熱墊 (40℃) 或培養箱 (33℃) 中給動物重新升溫。
幼仔能夠在(zài)無直接物理刺激的情況下移動後,可將其歸還給母鼠。
吸入麻醉
新(xīn)生齧齒(chǐ)動物(wù)可能比成年齧齒動物需要更長的吸入麻醉誘導時間。
在麻醉盒中進行誘導通常需(xū) 5% 異氟烷,維持(麻醉誘導盒或鼻錐)需 1-2%(流速 = 0.3-0.6 L/min)。
注射麻醉
氯胺酮/塞拉嗪是 7 日(rì)齡以上(shàng)小鼠的推薦注射麻醉劑:通過 27g 針頭 IP 注(zhù)射 50-150 mg/kg 氯(lǜ)胺酮(tóng)和 5-10 mg/kg 塞拉嗪(最大體積 = 0.5 mL)。
對(duì)於7日齡以上的小鼠(shǔ),推薦使用氯胺酮/塞拉嗪作為注射麻醉劑:使用27g針頭腹腔注射50-150 mg/kg氯胺(àn)酮(tóng)和5-10 mg/kg塞拉嗪(qín)(最大體積(jī)=0.5 ml)。